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上海捷易生物科技有限公司(Shanghai Gemple Biotech Co.Ltd)于2010年3月,由國內外知名學府的多名生命科學和臨床醫學從業者始立。公司落戶在張江高科生物醫藥核心園區,專注于新一代技術在遺傳病的臨床檢測以及科研轉化兩大領域的產業化應用。捷易長期致力于遺傳病從分子診斷到疾病建?!糯膊∽芯空宸窠餼齜槳?。 公司簡介 合作伙伴 團隊建設 加入捷易 企業顧問 聯系我們 新聞中心
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誘導多能干細胞
當CRISPR基因編輯遇見iPS細胞

CRISPR用于人類iPS可以揭示基因在特定疾病中起到的作用,甚至可以校正患者細胞的基因缺陷。雖然CRISPR-Cas9和人類iPS在實驗室中已經相當普及了,但二者相結合并沒有想象中那么容易。The Scientist雜志與多位正在使用這兩個工具的專家聯系,推出了在人類干細胞中使用CRISPR的基礎指南。這份指南對人iPS和人胚胎干細胞同樣適用。


案例1:心肌系統-Titin基因變異的擴張型心肌病模型建立



研究背景

肌聯蛋白(TITIN)是一個巨大的肌小節蛋白,具有復雜的、分子折疊的功能,對肌肉細胞的舒張和收縮起重要作用。

導致Titin蛋白翻譯截斷的變異(TTNtv)是擴張型心肌?。―CM)中最常見的致病變異,約占20%。大部分的致病TTNtv

都集中在A帶區域,而I帶區域上發生的TTNtv則是可以耐受的。臨床上還鑒定出大量的TTN錯義突變,臨床意義尚不明確。

建立一個有效的DCM模型將有利于變異分類、疾病機制研究和下游藥物開發。                        


       研究思路:建系&分化—疾病表型模擬—分子水平分析—小分子測試

        1)建立病人/正常人的iPS細胞并分化成為心肌細胞;同時利用CRISPR-Cas9系統在野生型iPSC中引進特異變異





“p” patient- derived;

“c” CRISRP/Cas9-derived mutations



       2)心肌細胞水平上未見肌張力變化相關表型,但是在心肌細胞3D培養形成的類器官上可以觀察到生理水平的變化;進一步檢測到肌節異常






3)RNA-seq用于分子水平分析,揭示TGFβ通路及VEGF通路下調

      4)VEGF處理可以提高變異的心肌類器官的肌張力水平,為藥物開發提供可能的靶點




案例2:杜氏肌營養不良(DMD)的小鼠基因治療模型建立



研究背景


杜氏肌營養不良(DMD)

       1)X染色體連鎖的隱性遺傳疾??;幼兒期(3-5歲)發病,肌無力,進行性加重,大約12歲失去獨立行走能力,

        易患擴張型心肌病,通常在20歲前死于肺炎、呼吸衰竭或者心力衰竭                    

          2)致病原因:DMD基因功能缺失,主要變異類型是大片段缺失或者移碼突變                        

                     

貝氏肌營養不良(BMD)

       1)晚發型肌無力,通常壽命可以達到40歲以上;癥狀較DMD輕微                          

                2)致病原因:DMD基因功能部分缺失,主要變異類型是小片段in-frame缺失或者錯義突變                    

                 DMD基因非常大,過去的基因治療策略大部分是過表達截短的Dystrophin蛋白來部分回復蛋白功能            


外顯子跳躍策略在DMD治療中的應用

針對移碼突變型的DMD,把發生移碼突變的一小段外顯子整個去除,得到一個中部截短的蛋白,依然能行使大部分功能——DMD變成BMD。




研究思路

  1)利用CRISPR-Cas9技術,在Exon兩端設計兩個sgRNA作用位點,切掉相關外顯子區域

  2)一步到位,從基因層面緩解DMD                              




科學方案設計
細胞預實驗
sgRNA 靶點設計
細胞打靶
單克隆培養
單克隆細胞株位點驗證
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